正交设计优化假俭草SRAP-PCR反应体系及引物筛选

摘要：

以假俭草叶片DNA为模板,采用正交试验设计,以Mg2+、dNTP、引物和Taq DNA聚合酶4种因素3个水平,对假俭草SRAP反应体系进行研究,并比较了不同浓度模板DNA对扩增效果的影响,建立了假俭草的SRAP最佳反应体系.结果表明,假俭草SRAP-PCR最佳反应体系为:2 μL 10譖CR buffer、60 ng模板DNA、Mg2+1.50 mmol/L、dNTP 260 μmol/L、引物0.25 μmol/L、Taq DNA聚合酶0.5 U,总体积为20 μL.各因素对扩增反应结果均有不同影响,其中以Mg2+浓度影响最大,Taq DNA聚合酶的影响最小.运用该体系对4份假俭草种源进行验证,证明该体系稳定可靠,并从45个SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的26个引物组合.这一体系的建立及多态性引物组合的筛选为今后利用SRAP标记技术进行假俭草分子遗传学研究提供了科学依据.

关键词：假俭草、SRAP标记、正交试验设计、体系优化、引物筛选

所属期刊栏目：17

分类号：S543+.903.7;Q94-33(饲料作物、牧草)

资助基金：国家自然科学基金30670200

在线出版日期：2008-10-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：110-117