山生柳SSR-PCR反应体系优化

摘要：

本研究以祁连山4个海拔梯度的山生柳（Salix oritrepha）为材料,采用L9（34）正交试验设计和单因子试验,分析山生柳SSR技术中PCR体系的主要成分对扩增结果的影响,并对引物SHUK123的适宜退火温度进行优化。结果表明,PCR反应体系的最佳条件：20μL体系中2.0mmol·L-1 Mg2＋1μL,0.10mmol·L-1 dNTPs1.5μL,0.5UTaq酶用量为1μL,20ng·μL-1 DNA模板1μL,0.5μmol·L-1的上下游引物各2μL,10×TaqBuffer 2μL,ddH2O加至20μL。扩增反应程序：94℃高温预变性时间3min,94℃变性45s,Tm（不同退火温度）退火时间45s,72℃延伸30s,循环数30个,最后72℃后延伸时间5min,4℃保温。适宜退火温度为56℃。以上结果表明,此反应体系在山生柳PCR扩增中的稳定性和可重复性较好。

关键词：山生柳、SSR-PCR、体系优化

所属期刊栏目：29

分类号：S792.12;Q945.79(森林树种)

资助基金：教育部高等学校博士点基金20096202110002

在线出版日期：2012-09-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：741-747