垂穗披碱草ISSR反应体系的正交优化

摘要：

以垂穗披碱草(Elymus nutans)基因组DNA为模板,对ISSR-PCR反应体系中5个因素(TaqDNA聚合酶、Mg2+、模板DNA、dNTPs、引物)进行优化试验.建立垂穗披碱草稳定的ISSR-PCR反应体系及最佳扩增程序.在25 μL反应体系中,最佳反应体系为2.5 μL 10×buffer(不含Mg2+)、1.0 U Taq酶、2.0 mmol/L Mg2+、30～120ng模板DNA、0.25 mmol/L dNTPs、0.25μmol/L引物.在优化体系的基础上筛选出11条多态性丰富.扩增稳定的引物,并通过设置退火温度梯度、循环次数梯度、延伸时间梯度.得到垂穗披碱草ISSR-PCR最佳扩增程序.反应程序:94℃预变性2 min,94℃变性1 min,51℃退火1min(视不同引物而定).72℃延伸1.5 min,共41个循环,72℃延伸10 min.通过对ISSR-PCR最佳反应体系和最佳扩增程序的验证.发现该反应体系和扩增程序具有较高的稳定性和较好的重复性.

关键词：垂穗披碱草、ISSR-PCR、正交优化

所属期刊栏目：28

分类号：S543+.9;Q94-33(饲料作物、牧草)

资助基金：2008年度中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金中国农业科学院草原研究所,2008-Z-1;农业部"948"牧草种质资源收集与创新利用平台建设2006-G84-21;国家科技基础条件平台建设项目2005DKA21007

在线出版日期：2015-07-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：738-745