美国白蛾氨肽酶N的基因克隆表达及与苏云金杆菌3种毒素蛋白的结合特性分析

摘要：

美国白蛾(Hyphantria cunea)是桑树的重要害虫.为明确苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)杀虫晶体蛋白对该虫的作用机制,利用已知昆虫氨肽酶N基因序列设计引物,以美国白蛾中肠cDNA为模板,利用RACE-PCR技术获得美国白蛾中肠氨肽酶N基因hcapn1全长序列(GenBank登录号:KP053647).该基因开放阅读框为3 000bp,编码999个氨基酸,预测蛋白质的分子质量和等电点分别为113.14 kD和4.85.设计去信号肽引物PCR扩增获得hcapn1基因序列,构建原核重组表达载体pET30a-hcapn1,诱导表达的HcAPN1重组蛋白约110 kD.将苏云金杆菌Cry1Ac、Cry2Ab33和Cry9Ea6原毒素经胰蛋白酶消化后与HcAPN1重组蛋白分别进行体外配体印迹试验,发现HcAPN1重组蛋白与Cry9Ea6结合,而不与Cry2Ab33、Cry1Ac发生特异结合,推测HcAPN1可能为Cry9Ea6在美国白蛾中肠的受体蛋白.分别设计引物扩增HcAPN1蛋白2个结构域Asp34～Asp527和Leu563～Gln925的编码序列,在大肠埃希菌中表达获得62 kD和48 kD 2种重组蛋白,体外结合试验显示Cry9Ea6与HcAPN1的结合发生在Leu563 ～ Gln925之间.研究结果为深入理解苏云金杆菌Cry9Ea6蛋白对美国白蛾的杀虫机制提供了基础数据.

关键词：美国白蛾、氨肽酶N、Bt蛋白、配体印迹

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分类号：S888.739;Q786(蚕桑)

资助基金：现代农业产业技术体系建设专项;河北省自然科学基金;河北省山区核桃近自然生产技术创新与示范项目

在线出版日期：2019-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：24-31