家蚕丝素P25蛋白的多克隆抗体制备与应用

摘要：

P25蛋白是家蚕(Bombyx mori)丝素蛋白的主要成分之一.根据BmP25基因ORF序列设计引物,以家蚕5龄第3天丝腺cDNA为模板,RT-PCR扩增获得BmP25的ORF全长片段.将构建的含BmP25的原核表达重组质粒转化大肠埃希菌Rosetta(DE3)菌株感受态细胞,对家蚕丝素P25蛋白进行重组表达和纯化,并免疫家兔制备获得多克隆抗体,用于研究家蚕丝腺中P25蛋白的合成和分泌规律.利用制备的多克隆抗体对家蚕品种大造5龄第3天幼虫9个组织的总蛋白质样品进行Western blot检测,结果在中部丝腺和后部丝腺检测到P25蛋白,表明该抗体有较好的特异性.进一步利用此多克隆抗体分别对家蚕5龄第5天幼虫中部丝腺和后部丝腺不同区域进行荧光免疫组化分析,结果在后部丝腺的细胞和腔内观察到明显的荧光信号,而中部丝腺后部的细胞仅有微弱信号,腔内的荧光信号强度随着丝素蛋白的从后向前运输越来越弱,以致在中部丝腺的前部和中部未检测到荧光信号.推测可能是P25蛋白在丝素蛋白从溶胶状态到凝胶状态的转化过程中,被逐步包裹在丝素蛋白聚合物中导致其不能被检测到.利用该多克隆抗体对家蚕不同品种的茧丝蛋白进行Western blot检测,均能获得特异性的杂交条带,表明该抗体还可用于家蚕茧丝及丝制品的分子检测鉴定,为开发丝制品的检测试剂盒提供了条件.

关键词：丝素蛋白、P25蛋白、原核表达、多克隆抗体、免疫印迹分析、荧光免疫组化

所属期刊栏目：42

分类号：S881.2(蚕桑)

资助基金：国家自然科学基金;家蚕基因组生物学国家重点实验室开放基金

在线出版日期：2016-11-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：820-825