家蚕化蛹初期血液中卵黄原蛋白BmVg的纯化和鉴定

摘要：

卵黄原蛋白(vitellogenin,Vg)是昆虫血液中发现最早的蛋白质,对于昆虫的繁殖至关重要.以家蚕Vg基因(Bm Vg)的部分序列构建原核表达载体,转化E.coil BL21(DE3)菌株,在20℃条件下用0.6 mmol/L IPTG进行诱导表达,表达产物经镍柱亲和层析纯化得到家蚕卵黄原蛋白BmVg的肽蛋白.以BmVg肽蛋白为抗原制备的兔源多克隆抗体效价＞1∶512 000.采用硫酸铵分级沉淀和阴离子交换层析的纯化方法,从家蚕化蛹初期的血液中纯化获得天然的BmVg蛋白,并用制备的多克隆抗体进行Western blotting检测,鉴定此纯化的天然蛋白质为BmVg蛋白.建立的BmVg分离纯化技术将有助于进一步研究BmVg的合成、转运及利用机制.

关键词：家蚕、卵黄原蛋白、原核表达、分离纯化、免疫印迹法

所属期刊栏目：40

分类号：S881.2;Q786(蚕桑)

资助基金：国家高技术研究发展计划“863”项目2011AA-100306;国家自然科学基金青年基金项目31101768;国家自然科学基金项目31201853

在线出版日期：2014-05-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：230-234