家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂5的多克隆抗体制备及组织表达分析

摘要：

为探讨家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂5(Serpin-5)的功能,制备其多克隆抗体并分析该蛋白质在家蚕组织中的表达特征.克隆获得去除信号肽的家蚕serpin-5基因,该基因大小为1 140 bp,编码379个氨基酸残基,预测蛋白质分子质量42.6 kD,等电点6.02.构建用于原核表达的pET28 a-serpin-5载体,并在E.coli BL21中进行重组蛋白的诱导表达.经SDS-PAGE分析表明重组家蚕Serpin-5蛋白多以包涵体的形式存在,纯化后的融合蛋白的分子质量与预测值相符.以此为抗原免疫昆明小鼠,Western blot检测制备的多克隆抗体具有较高的特异性,ELISA检测该多抗对免疫抗原的效价达到1∶24000.在制备高效价抗体的基础上,通过Western blot检测家蚕Serpin-5蛋白在5龄第3天幼虫精巢、卵巢中的表达量较高,中肠次之,在丝腺、马氏管、脂肪体中的表达量较低.推测家蚕Serpin-5蛋白在生殖腺中的高表达可能与家蚕的生殖功能相关.

关键词：家蚕、丝氨酸蛋白酶抑制剂、原核表达、多克隆抗体、组织表达

所属期刊栏目：39

分类号：S881.2;Q78(蚕桑)

资助基金：现代农业产业技术体系专项CARS-22;江苏高校优势学科建设工程项目

在线出版日期：2013-05-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：261-265