家蚕脂围蛋白(PLIN)基因的序列分析及表达与亚细胞定位研究

摘要：

脂围蛋白(perilipin)与脂肪细胞脂类代谢的调节有关.从家蚕蛹cDNA文库中筛选到一条cDNA开放阅读框(ORF)序列长度为918 bp的基因,预测其编码305个氨基酸残基,蛋白分子质量约32.5 kD.经NCBI比对发现该蛋白具有部分脂围蛋白的保守结构域,因此将该ORF序列命名为BmPLIN基因.将该基因插入到载体pET-28a( + )的多克隆位点,构建重组表达质粒pET-28a( + )-BmPLIN,并转化大肠杆菌中进行原核表达得到带有His标签的融合蛋白,表达的融合蛋白以包涵体形式存在.用纯化后的融合蛋白为抗原免疫大白兔获得多克隆抗体,ELISA间接法测定抗体的效价达到1∶12 800以上.通过荧光定量PCR和Western blotting技术对BmPLIN基因及其编码蛋白在家蚕5龄幼虫各个组织器官中的转录、表达水平进行分析的结果是: BmPLIN基因mRNA在家蚕5龄幼虫各组织器官中的转录水平由高到低依次为生殖腺(卵巢和睾丸)、脂肪体、肠、表皮、头部、马氏管、丝腺、气门,在家蚕5龄幼虫的生殖腺(卵巢和睾丸)中有明显的BmPLIN蛋白特异条带.以家蚕Bm5细胞进行免疫细胞实验的结果显示,BmPLIN蛋白在细胞质和细胞核中均有分布.

关键词：家蚕、脂围蛋白、蛋白纯化、基因表达、亚细胞定位

所属期刊栏目：35

分类号：S881.2;Q78(蚕桑)

资助基金：国家重点基础研究发展计划"973"项目编号 2005CB12-1006;国家高技术研究发展计划"863"项目编号 2007AA021703,2007AA100504

在线出版日期：2010-03-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：737-745