家蚕含RRM保守结构域蛋白基因(Bmrrm)的克隆及序列分析与表达研究

摘要：

RRM (RNA recognition motif)是RNA结合蛋白中广泛存在的一种保守结构域.从构建的家蚕蛹cDNA文库中筛选得到一条含有RRM保守结构域的cDNA,命名为Bmrrm(GenBank登录号:DQ534196).Bmrrm基因全长 1 086 bp,开放阅读框大小为 894 bp,编码297个氨基酸残基,蛋白理论分子质量 33.2 kD,等电点9.69,预测的三级结构由2个α螺旋和4个β折叠组成.将该基因的PCR扩增产物于原核表达载体pET-28a( + )中表达后经 SDS-PAGE检测,在 36 kD处的特异性蛋白条带与预期值相符,重组蛋白以可溶的形式表达.将纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,ELISA检测效价大于1∶6 400.采用荧光定量PCR方法对家蚕卵、5龄幼虫、蛹、蛾4个发育时期以及5龄幼虫各组织中Bmrrm的mRNA转录水平进行检测比较,发现在蛹期和5龄幼虫生殖腺、表皮中的转录水平较高.采用免疫印迹方法在家蚕的卵期、5龄幼虫、蛹期,以及5龄幼虫的生殖腺、表皮、脂肪体中检测到BmRRM蛋白有明显表达,但在蛾期及5 龄幼虫的其他组织中未检测到该蛋白.以家蚕Bm5细胞进行免疫细胞化学实验,BmRRM蛋白在整个细胞周期主要分布于细胞核,仅少量分布于细胞质.初步推测BmRRM蛋白参与蚕体内RNA前体的剪接、细胞定位及维持稳定等转录后调控过程.

关键词：家蚕、Bmrrm基因、荧光定量PCR、组织表达、亚细胞定位

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分类号：S881.2;Q78(蚕桑)

资助基金：国家重点基础研究发展计划"973"项目编号 2005CB12-1006;国家高技术研究发展计划"863"项目编号 2007AA021703,2007AA100504

在线出版日期：2009-11-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：499-507