利用蛋白转导域介导的新型大分子转染方法

摘要：

目的 构建蛋白转导域(PTD)与扩增链亲和素( Strep)融合蛋白,用于转染常规操作中难于转染生物大分子的血液肿瘤细胞、神经细胞、干细胞等细胞系.方法 采用聚合酶链反应( PCR)法引入PTD和G4S序列、扩增Strep序列；经酶切、连接构建重组质粒pAYZ-PTD-Strep,用低磷培养液AP5诱导表达融合蛋白,E-tag亲和层析柱纯化产物,Western blot鉴定产物,利用pAYZ-PTD-Strep将eGFP质粒转染到悬浮U937细胞内,流式细胞术测定融合蛋白转染效率.结果 目的产物PTD-G4S-Strep融合蛋白以可溶形式表达,产量约为0.7 mg/L,经E-tag亲和层析柱纯化后纯度可达90％以上.融合蛋白PTD-Strep可成功将质粒运送至悬浮细胞U937内,转染效率高于PTD单体.结论 构建的融合蛋白PTD-Strep具有将生物大分子转入血液肿瘤悬浮细胞内的活性,有望发展成为一种高效、可靠的真核细胞转染方法.

关键词：蛋白转导域、转染

所属期刊栏目：21

分类号：R733.7(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金81201729

在线出版日期：2012-12-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：581-584