婆罗双树样基因4 shRNA干扰载体的构建及其对THP-1细胞的转染

摘要：

目的 构建针对婆罗双树样基因4(SALL4)的特异性shRNA干扰载体,并转染THP-1细胞,以期为更深入了解SALLA对白血病的作用,为后续研究提供实验工具.方法 设计4条针对不同靶点的SALL4特异性siRNA和一条阴性干扰siRNA,分子克隆方法构建pGPU6/GFP/Neo/SALIAshRNA干扰载体,转染THP-1细胞,比较未转染细胞、阴性干扰转染细胞和4条SALL4 shRNA转染细胞的SALL4表达情况,找出干扰效果最好的SALL4 shRNA.结果 4种SALL4 shRNA均能有效转染THP-1细胞,实时定量PCR(RT-PCR)与Western blotting结果均显示针对靶点mRNA-1122的pGPU6/GFP/Neo/SALL4 shRNA-B干扰效果最佳,SALL4表达减少量最多(P<0.05).结论 成功构建SALL4 siRNA干扰载体,可选择SALL4 shRNA-B载体进一步完成对SALL4基因功能的研究工作.

关键词：癌基因、SALL4、短发夹RNA、THP-1细胞、RNA、小分子干扰

所属期刊栏目：19

分类号：R3(基础医学)

在线出版日期：2010-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：12-15