miR-761通过调控肿瘤相关巨噬细胞极化对骨肉瘤MG63细胞上皮-间质转化的影响

摘要：

目的:分析外泌体(Exo)微小RNA-761(miR-761)通过调控肿瘤相关巨噬细胞(TAM)极化对骨肉瘤(OS)细胞上皮-间质转化(EMT)进程的影响,阐明其相关的作用机制.方法:miR-761质粒和阴性对照(miR-NC)质粒分别转染至HEK239细胞中,同时设不转染的细胞为对照组,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测转染效果.分离含miR-761的Exo,采用透射电镜观察Exo形态,采用纳米颗粒分析仪检测Exo样品浓度和粒径分布,Western blotting法检测Exo表面标志蛋白表达情况.采用佛波酯(PMA)刺激人单核细胞白血病THP-1细胞成为M0巨噬细胞,采用含miR-761的Exo处理M0巨噬细胞并与O S MG63细胞建立共培养体系,实验分组为M0组、TAM组、miR-761 NC组和miR-761 Exo组,收集各组M0巨噬细胞,流式细胞术检测各组细胞中M1巨噬细胞标志物CD86和M2巨噬细胞标志物CD206阳性率,Western blotting法检测各组细胞中M1巨噬细胞分泌因子白细胞介素1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)和M2巨噬细胞分泌因子白细胞介素10(IL-10)及转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达水平;采用含miR-761的Exo处理M0巨噬细胞并与MG63细胞建立共培养体系,实验分为对照组、TAM组、miR-NC Exo+TAM组和miR-761 Exo+TAM组,收集各组MG63细胞,免疫荧光染色法观察各组MG63细胞中E-钙黏附蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)荧光强度,Western blotting法检测各组细胞中E-cadherin、Vim entin及EMT调控相关转录因子Twist1、Snail和Slug蛋白表达水平,Transwell小室实验检测各组MG63细胞中侵袭和迁移细胞数.结果:通过转染实验成功获得含miR-761的HEK239细胞,并分离得到Exo.与M0组比较,TAM组巨噬细胞中CD86阳性率降低(P＜0.05),CD206阳性率升高(P＜0.05),IL-1β和TNF-α蛋白表达水平降低(P＜0.05),IL-10和TGF-β1蛋白表达水平升高(P＜0.05);与TAM组比较,miR-761 Exo组巨噬细胞中CD86阳性率升高(P＜0.05),CD206阳性率降低(P＜0.05),IL-1β和TNF-α蛋白表达水平升高(P＜0.05),IL-10和TGF-β1蛋白表达水平降低(P＜0.05).与对照组比较,TAM组MG63细胞中E-cadherin荧光表达强度减弱而Vimentin荧光表达强度增强,E-cadherin蛋白表达水平降低(P＜0.05),Vimentin、Twist1、Snail和Slug蛋白表达水平升高(P＜0.05),迁移细胞数和侵袭细胞数增加(P＜0.05);与TAM组比较,miR-761 Exo+TAM组MG63细胞中E-cadherin荧光表达强度增强而Vimentin荧光表达强度减弱,E-cadherin蛋白表达水平升高(P＜0.05),Vimentin、Twist1、Snail和Slug蛋白表达水平降低(P＜0.05),迁移细胞数和侵袭细胞数减少(P＜0.05).结论:Exo传递miR-761能够抑制OS细胞EMT进程,进而抑制细胞的迁移和侵袭,其作用机制可能与调控TAM极化作用有关.

关键词：骨肉瘤、微小RNA-761、外泌体、上皮-间质转化、肿瘤相关巨噬细胞极化

所属期刊栏目：50

分类号：R738.1(肿瘤学)

资助基金：河南省科技厅科技发展计划项目222102310131

在线出版日期：2024-08-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：978-988