Fah-/-Rag2-/-IL2Rg-/-小鼠肝脏原位异种重建模型的建立及其评价
目的:构建猪-小鼠肝细胞嵌合模型,探讨猪肝细胞在无T淋巴细胞、B淋巴细胞和自然杀伤细胞(NK细胞)介导排斥条件下的移植及再生的相关条件,评估猪肝细胞在异种受体中的定居、增殖和功能因子分泌情况,为提高猪源化小鼠模型中猪肝细胞的重建效率提供依据.方法:采用脾脏内注射法将猪肝细胞移植至Fah-/-Rag2-/-IL2Rg-/-(FRG)小鼠体内,构建移植模型.将 16 只FRG小鼠随机分为对照组、空白对照组、实验组和绿色荧光蛋白(GFP)基因实验组,每组4只.空白对照组小鼠停止给予2-(2-硝基-4-三氟甲基苯甲酰基)-1,4-环己二酮(NTBC),监测体质量;对照组4只小鼠注射猪肝细胞,移植前1周停止给予NTBC,移植后监测体质量,当体质量下降20%时,给予NTBC 3 d;实验组小鼠注射猪肝细胞,移植前1周停止给予NTBC,移植后监测体质量,当体质量下降 20%时,给予NTBC 3 d;GFP基因实验组小鼠注射携带GFP基因猪肝细胞,移植前1周停止给予NTBC,移植后监测体质量,当体质量下降 20%时,给予NTBC 3 d.观察各组小鼠体质量、生存情况.检测各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,流式细胞术检测各组小鼠外周血中CD19+、CD3+和NK1.1+细胞表达情况,ELISA法检测各组小鼠血清中猪白蛋白表达水平,免疫组织化学法检测各组小鼠猪肝细胞再生效率.结果:与剪碎后再以胶原酶消化的方式比较,两步灌注法消化过程更温和、对细胞损伤更小,细胞活性可以达到92%.停止给予NTBC后,对照组小鼠体质量进行性降低,生命活力逐渐降低.连续停药第28天小鼠开始出现死亡现象.小鼠肝组织中出现肝细胞肿大、细胞浆疏松透亮和细胞核溶解等不可逆细胞损伤.空白对照组小鼠停药后血清中ALT水平逐渐升高.对照组停药小鼠重新给予NTBC后,体质量逐渐恢复至正常水平.流式细胞术,停止给予NTBC后,小鼠外周血中CD19+、CD3+和NK1.1+细胞完全缺失.免疫组织化学染色,实验组小鼠肝组织中未见深色Fah+阳性细胞,移植小鼠肝组织中可见深色Fah+阳性细胞,猪肝细胞再生效率为(11±4)%.GFP基因实验组小鼠可见同一视野经三色激光分别激发,猪肝细胞再生效率为(10±2)%.结论:成功构建了猪源化FRG小鼠肝脏嵌合模型,建立了长效稳定扩增猪肝细胞的小鼠模型.
肝细胞异种移植、Fah、肝细胞、猪-小鼠肝细胞嵌合模型、免疫缺陷小鼠
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R575(消化系及腹部疾病)
国家自然科学基金81870091
2023-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
1358-1365
