miR-107对卵巢癌细胞免疫逃逸的调控和紫杉醇耐药性的影响
目的:探讨微小RNA-107(miR-107)通过丝裂原活化蛋白3激酶7(MAP3K7)调控卵巢癌细胞免疫逃逸对紫杉醇(TAX)耐药性的影响,并阐明其作用机制.方法:293T细胞分为miRNC组(转染miR-NC)和miR-107 mimics组(转染miR-107 mimics).采用浓度梯度递增法处理卵巢癌SKOV3细胞,获得TAX耐药细胞SKOV3/TAX.SKOV3/TAX细胞随机分为空白对照组、TAX(给予4.0μmol·L-1 TAX)组、TAX+miR-107 mimics(给予4.0μmol·L-1 TAX且转染miR-107mimics)组和TAX+miR-107 mimics+pcDNA-MAP3K7(给予4.0μmol·L-1 TAX且转染miR-107mimics和pcDNA-MAP3K7)组;分别与人外周血淋巴细胞HPBL共培养,分为HPBL组、HPBL+SKOV3/TAX组、HPBL+SKOV3/TAX+TAX组、HPBL+SKOV3/TAX+TAX+miR-107 mimics组和HPBL+SKOV3/TAX+TAX+miR-107 mimics+pcDNA-MAP3K7组.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测细胞中miR-107表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-107和MAP3K7的靶向关系,Western blotting法检测各组细胞中MAP3K7和FAS蛋白表达水平,CCK-8法检测各组细胞存活率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率.结果:与人卵巢上皮细胞HOSEpic比较,卵巢癌细胞中miR-107表达水平降低(P<0.05).MAP3K7的3′-UTR与miR-107存在靶向结合位点.双荧光素酶报告基因实验,与miR-NC组比较,过表达miR-107组野生型MAP3K7的荧光素酶活性降低(P<0.01).Western blotting法检测,过表达miR-107组细胞中MAP3K7蛋白表达水平低于miR-NC组(P<0.01).RT-qPCR检测,与空白对照组比较,TAX组SKOV3/TAX细胞中miR-107 mRNA表达水平升高(P<0.01);与TAX组比较,TAX+miR-107 mimics组SKOV3/TAX细胞中miR-107mRNA表达水平升高(P<0.05).与空白对照组比较,TAX组SKOV3/TAX细胞中MAP3K7和FAS蛋白表达水平降低(P<0.01);与TAX组比较,TAX+miR-107 mimics组SKOV3/TAX细胞中MAP3K7和FAS蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01);与TAX+miR-107 mimics组比较,TAX+miR-107 mimics+pcDNA-MAP3K7组SKOV3/TAX细胞中MAP3K7和FAS蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01).与HPBL+SKOV3/TAX组比较,HPBL+SKOV3/TAX+TAX组HPBL细胞中FAS蛋白表达水平降低(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05);与HPBL+SKOV3/TAX+TAX组比较,HPBL+SKOV3/TAX+TAX+miR-107 mimics组HPBL细胞中FAS蛋白表达水平和细胞凋亡率降低(P<0.05);与HPBL+SKOV3/TAX+TAX+miR-107 mimics组比较,HPBL+SKOV3/TAX+TAX+miR-107 mimics+pcDNA-MAP3K7组HPBL细胞中FAS蛋白表达水平降低(P<0.01),且细胞凋亡率降低(P<0.01).与空白对照组比较,TAX组SKOV3/TAX细胞存活率降低(P<0.05);与TAX组比较,TAX+miR-107 mimics组SKOV3/TAX细胞存活率降低(P<0.05).与TAX+miR-107 mimics组比较,TAX+miR-107mimics+pcDNA-MAP3K7组SKOV3/TAX细胞存活率明显升高(P<0.05).与空白对照组比较,TAX组SKOV3/TAX细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与TAX组比较,TAX+miR-107组SKOV3/TAX细胞凋亡率升高(P<0.05);与TAX+miR-107 mimics组比较,TAX+miR-107 mimics+pcDNA-MAP3K7组细胞凋亡率降低(P<0.05).结论:miR-107在SKOV3/TAX细胞中呈低表达,且miR-107通过抑制MAP3K7的表达,抑制SKOV3/TAX细胞免疫逃逸,缓解卵巢癌细胞TAX耐药性.
卵巢肿瘤、微小RNA-107、免疫逃逸、紫杉醇、耐药
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R737.31(肿瘤学)
海南省科技厅科研项目;海南省临床医学中心建设项目
2022-06-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共10页
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