基于双重PCR技术的鹿茸及其伪品DNA指纹特征和鉴定
目的:分析鹿茸线粒体细胞色素b(Cytb)和细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因特异性,建立双重PCR技术鉴别鹿茸真伪的分子指纹特征.方法:利用碱变性法提取梅花鹿茸、马鹿茸、驯鹿茸和新西兰鹿茸的基因组DNA,应用引物设计软件Premier 5.0针对Cytb和COⅠ分别设计特异性引物(分别为Cytb 1、2和COⅠ1、2、3),采用单一及双重引物分别进行PCR扩增,筛选特异性强的引物,确定最佳PCR反应条件.结果:采用碱变性法提取的鹿茸基因组DNA片段长度为23000 bp,DNA纯度即A(260)/A(280)为1.80±0.02;应用单一引物进行PCR扩增无法鉴定鹿茸的真伪,而引物Cytb 1和COⅠ1组合后,解链温度为58℃时,梅花鹿茸(吉林、安徽)、马鹿茸均能扩增出395和525 bp大小的2个片段,而驯鹿茸和新西兰鹿茸均未能扩增出相应片段;采用该提取方法及最优化的PCR反应条件,对市售样品进行检测,检测结果与实际情况完全一致.结论:双重PCR技术可从分子水平鉴别鹿茸的真伪,该方法特异性高、实用性强,且简便快捷,在鹿茸真伪鉴别方面具有较高的应用价值.
鹿茸、细胞色素b、细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ、双重聚合酶链反应、DNA指纹
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R282.5;Q523(中药学)
吉林省科技厅重点科技成果转化项目资助课题20160307030YY,20170307001YY;吉林省发改委产业技术研究与开发项目资助课题2015Y077;吉林省教育厅"十二五"科学技术研究项目资助课题吉教科合字[2015]D143;国家级大学生创新创业训练计划项目资助课题201711923018;吉林省科技厅重点科技攻关项目资助课题20160204004NY
2018-08-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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