hISO基因原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达及鉴定

摘要：

目的:构建原核表达载体pET-28a(+)-hISO,探讨其融合蛋白在大肠杆菌中的稳定表达情况,为后续实验研究奠定基础.方法:以Caco-2细胞的总RNA为模版,采用RT-PCR方法扩增出大小为1 770 bp的人异麦芽糖酶(hISO)基因片段,将其插入到pET-28a(+)中,构建重组载体pET-28a(+)hISO.经PCR、酶切及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达,亲和层析纯化重组蛋白,利用SDS-PAGE电泳、Western blotting对重组蛋白进行分析和鉴定.结果:经PCR、酶切及测序鉴定后,重组质粒pET-28a(+)-hISO构建正确,表达重组蛋白相对分子质量为68 860,将融合蛋白进行纯化,经40和60 mmol·L-1咪唑缓冲液洗脱后能够得到浓度和纯度相对较高的蛋白.结论:成功地构建了hISO基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得了融合蛋白表达.

关键词：异麦芽糖酶、原核表达、α-葡萄糖苷酶、大肠杆菌

所属期刊栏目：42

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：贵州省科技厅社会发展攻关项目资助课题黔科合SY字20123091;遵义医学院青年科研启动基金资助课题F-501

在线出版日期：2016-05-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：59-63