利用Gateway克隆技术构建人Hiwi腺病毒载体

摘要：

目的：获得人的全长 Hiwi编码区基因，构建携带绿色荧光蛋白（GFP）的人 Hiwi腺病毒载体，为进一步研究 Hiwi诱导白血病干细胞分化和凋亡的作用和机制奠定基础。方法：运用重叠延伸 PCR方法扩增Hiwi编码区基因全长；利用 Gateway克隆技术将 Hiwi编码区基因全长插入带有 GFP的载体 Flag-IRES-hrGFP中构建成为 pDown-Hiwi-3× flag-IRES-hrGFP，再将克隆载体 pDown-Hiwi-3× flag-IRES-hrGFP 与表达载体pAV.Des1d进行同源重组反应，得到重组腺病毒载体 pAV.Ex1d-Hiwi-3×flag-IRES-hrGFP。经 PCR筛选阳性克隆提取重组腺病毒质粒，包装成重组Ad-Hiwi-3×flag-IRES-hrGFP腺病毒。结果：人 Hiwi全长编码区基因克隆成功，经酶切及基因测序鉴定证实重组 Ad-Hiwi-3× flag-IRES-hrGFP 腺病毒质粒构建成功。采用Lipofectamine法将 Ad-Hiwi-3×flag-IRES-hrGFP转染入 HEK293A细胞中，在荧光显微镜下，可以观察到转染细胞中的绿色荧光。结论：成功构建重组 Ad-Hiwi-3×flag-IRES-hrGFP腺病毒质粒，其可在 HEK293A细胞内表达。

关键词：Hiwi基因、腺病毒、重叠延伸聚合酶链反应、Gateway克隆技术

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：吉林省科技厅科研基金资助课题200705181

在线出版日期：2014-08-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：898-903