Tat-GFP融合蛋白的表达纯化及其穿膜活性

摘要：

目的：获得具备穿膜活性与绿色荧光蛋白（GFP）标记的 Tat-GFP 融合蛋白，探讨 Tat-GFP 在MCF-7细胞中的跨膜转运特性。方法：应用 pET-24a-Tat-GFP质粒转化大肠杆菌 BL21感受态细胞，检测不同异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）浓度（0.5和1.0 mmol·L-1）和不同温度（22℃和37℃）诱导融合蛋白的表达情况；利用 Ni-IDA树脂亲和纯化Tat-GFP蛋白，利用 GFP特异性抗体采用 Western blotting法分析洗脱液中的蛋白；激光共聚焦荧光显微镜下检测Tat-GFP融合蛋白的跨膜转运活性。结果：0.5和1.0 mmol· L-1 IPTG诱导出的细菌总蛋白中所含的 Tat-GFP蛋白量无明显差异；低温（22℃）诱导生产的 Tat-GFP蛋白量较37℃更高；Western blotting分析，GFP抗体能够特异性识别PVDF膜上的蛋白，条带灰度与Tat-GFP蛋白上样量有关联；细胞穿膜实验，绿色荧光分布于 MCF-7细胞的细胞质和细胞核中。结论：低温诱导时大肠杆菌 BL21菌体上清液中Tat-GFP融合蛋白量更高，所生产的Tat-GFP融合蛋白既具备穿膜活性又具有易于检测的绿色荧光。

关键词：Tat-GFP、细胞穿膜肽、融合蛋白、穿膜活性

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金资助课题81150015；吉林省科技厅科技发展计划项目资助课题20111809；吉林省吉林市科技局科技发展计划项目资助课题201233126

在线出版日期：2014-08-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：725-728