RUNX3全长和不同结构域原核表达载体的构建及其重组蛋白表达

摘要：

目的:构建RUNX3全长和不同结构域的原核表达载体并表达其重组蛋白.方法:以pcDNA3.1myc-RUNX3为模板,采用PCR法扩增RUNX3全长和各个结构域片段,通过EcoR Ⅰ和BamHⅠ酶切位点将RUNX3全长和不同结构域定向插入谷胱甘肽转移酶(GST)融合表达载体pGEX-4T-2中,在大肠杆菌(E.coli) BL21中诱导其融合蛋白表达,SDS PAGE电泳检测其蛋白表达情况.结果:EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后得到与预期大小相符的FL(1 245 bp)、△Runt (843 bp)、Nter (159 bp)、Runt (402 bp)和Cter (684 bp)5个载体片段.SDS-PAGE电泳检测,RUNX3全长及各个结构域截短GST-RUNX3截短融合蛋白(GST-FL、GST-Runt、GST-Nter和GST Cter)相对分子质量分别为72 000、40 000、32 000和51 000.结论:成功构建RUNX3全长和各个结构域截短的GST标签的原核表达载体,并实现其重组蛋白在原核细胞中的表达.

关键词：RUNX3、载体、蛋白诱导、蛋白表达

所属期刊栏目：39

分类号：Q257(细胞生理学)

资助基金：国家自然科学基金资助课题30871294;辽宁省自然科学基金资助课题201102277

在线出版日期：2015-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1112-1115