miR-210靶基因HBVSP2的鉴定

摘要：

目的:构建miR-210的过表达载体,利用双荧光蛋白报告基因分析系统验证miR-210的靶基因HBVSP2.方法:构建含有miR-210前体序列的miR-210的过表达质粒pcDNA3.1(+)/pri-miR-210;选取表达绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒pcDNA3/EGFP,将miR-210在HBVSP2上靶位点的一段特异性序列插入该质粒中,构建EGFP报告载体pcDNA3/EGFP-H BVSP2,并与miR-210ASO或者pcDNA3.1(+)/pri-miR-210及表达红色荧光蛋白质(RFP)的pDsRed2 -N1共同转染HEK293以及HepG2 2215细胞,用荧光分光光度计定量检测转染后提取的蛋白样品的荧光值.结果:共同转染pcDNA3/pri-miR-210和pcDNA3/ EGFP-HBVSP2质粒后,EGFP/RFP的表达量明显低于pcDNA3和pcDNA3/ EGFP- HBVSP2共转染组,差异具有统计学意义(P＜0.05).pcDNA3/pri-miR-210和pcDN A3/EGFP- HBVSP2组EGFP/RFP低于pcDNA3和pcDNA3/EGFP-HBVSP2共转染组(P＜0.05).共转染miR-210ASO和pcDNA3/EGFP-HBVSP2组EGFP/RFP的表达量高于共转染LacZ和pcDNA3/EGFP-HBVSP2组,差异具有统计学意义(P＜0.05).LacZ和pcDN A3/EGFP-H BVSP2组EGFP/RFP低于LacZ和pcDNA3/EGFP组(P＜0.05).结论:成功构建miR-210的过表达质粒pcDNA3.1(+)/pri-miR-210和含有miR-210靶位点的pcDNA3/EGFP- HBVSP2,HBVSP2可能是miR-210的直接靶基因.

关键词：质粒、miR-210、基因、表达、转染

所属期刊栏目：38

分类号：R575.1(消化系及腹部疾病)

资助基金：河北省自然科学基金资助课题C2012401037

在线出版日期：2015-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：501-505