辐射诱导的重组载体pEgr1-hsTRAIL对肺腺癌A549细胞的生长抑制作用

摘要：

目的:构建Egr1介导的人分泌型肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(hsTRAIL)重组表达载体pEgr1-hsTRAIL,探讨其对人肺腺癌A549细胞的生长抑制作用.方法:利用基因重组技术构建Egr1介导的hsTRAIL重组载体,PCR、酶切和测序鉴定正确后转染A549细胞,给予6GyX射线照射.实验分为对照(Control),pEgr1-hsTRAIL、6 GyX射线和pEgr1-hsTRAIL+6 Gy X射线组.ELISA法检测各组A549细胞中hsTRAIL的表达,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,TUNEL法检测细胞凋亡变化.结果:成功构建Egr1调控的hsTRAIL重组载体pEgr1-hsTRAIL,质粒转染后经6GyX射线照射,对照组、6 Gy组和pEgr1-hsTRAIL组hsTRAIL蛋白表达随时间延长变化不明显,而pEgr1-hsTRAIL+6 Gy组随时间延长hsTRAIL蛋白表达显著增加(P＜0.05或P＜0.01),8h达到峰值;pEgr1-hsTRAIL组A549细胞增殖能力与对照组比较无明显差异,6 Gy和pEgr1-hsTRAIL+6 Gy组A549细胞增殖能力较对照组显著降低,pEgr1-hsTRAIL+6 Gy组降低更明显(P＜0.05或P＜0.01);与对照组比较,pEgr1-hsTRAIL组A549细胞各期百分比变化不明显,而6 Gy和pEgr1-hsTRAIL+6 Gy组G0/G1期细胞百分比明显增加(P＜0.05),G2/M期细胞百分比明显降低(P＜0.05),S期细胞百分比无明显变化;各期细胞百分比在6 Gy和pEgr1-hsTRAIL+6 Gy组基本一致;与对照组比较,pEgr1-hsTRAIL组A549细胞凋亡百分比无明显变化,而6 Gy和pEgr1-hsTRAIL+6 Gy组A549细胞凋亡百分比明显增加(P＜0.01),其中pEgr1-hsTRAIL+6 Gy组增加更明显.结论:成功构建Egr1介导的hsTRAIL重组表达载体pEgr1-hsTRAIL,其能够增加辐射对A549细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,而对细胞周期分布影响不大.

关键词：Egr1、分泌型肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体、基因重组、辐射、细胞凋亡

所属期刊栏目：38

分类号：R734.2(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助课题30901702;吉林大学科学前沿与交叉学科创新项目资助课题201103052

在线出版日期：2015-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：398-403,封2