表达Cre重组酶Cre-pCEP4载体的构建及其在Cre/loxP重组系统中的应用

摘要：

目的:构建表达Cre重组酶的载体Cre-pCEP4,并验证其能够有效识别loxP位点,为人类疾病动物模型的建立提供依据.方法:构建重组载体Cre-pCEP4和pStop-eGFP,利用Fugene HD转染猪胚胎成纤维细胞(PEF)和MCF-7细胞系,利用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况.结果:成功构建重组载体Cre-pCEP4和pStop-eGFP,将2个载体瞬时共转染PEF;经潮酶素B筛选出Cre重组酶稳定表达的MCF-7细胞系瞬时转染pStop-eGFP,在荧光显微镜下观察2种细胞均有绿色荧光蛋白的表达.而单独转染pStop-eGFP的MCF-7细胞系和PEF均未见绿色荧光蛋白的表达.结论:重组载体Cre-pCEP4在细胞内能够表达Cre重组酶,并且表达的Cre重组酶能够识别loxP位点,删除两同向loxP间的DNA片段.

关键词：Cre-pCEP4、Cre/loxP重组系统、猪胚胎成纤维细胞、MCF-7细胞系

所属期刊栏目：37

分类号：Q291

资助基金：国家自然科学基金资助课题30771582,130871841

在线出版日期：2015-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：196-201,封2