抗Peroxiredoxin Ⅰ肺腺癌噬菌体抗体的筛选及其在荷瘤裸鼠体内的分布

摘要：

目的:通过对已构建的肺腺癌相关人源单链抗体库进行筛选,得到抗过氧化物酶Peroxiredoxin Ⅰ (Prx Ⅰ)肺腺癌单链抗体,评价抗体在动物模型体内分布及靶向显像作用.方法:PCR法检测大肠杆菌TG1中单链抗体single-chain variable fragment (scFv) 基因插入率;凝胶电泳鉴定Sfi Ⅰ和NotⅠ双酶切质粒结果;以肺腺癌细胞株A549和在肺癌中高表达的抗氧化蛋白Prx Ⅰ为靶抗原,对抗体库进行富集筛选.阳性克隆用IPTG诱导表达并检测.放射性核素131I标记纯化抗体,进行荷瘤裸鼠体内分布及SPECT放射免疫显像研究.结果:scFv基因插入率为77%(23/30),双酶切鉴定证实目的条带.通过亲和筛选,肺腺癌单链抗体得到富集,收获率逐轮提高,第6轮是第1轮的180倍.选取10个克隆经ELISA法检测,其中6个克隆与A549细胞呈阳性反应,阳性率60%(6/10).SDS-PAGE及ELISA检测证实得到人源抗Prx Ⅰ肺腺癌单链抗体.竞争ELISA显示抗体能有效结合A549细胞.核素标记抗体的放射化学纯度为(95.6±3.7)%,比活度为(2.8±0.2) TBq·g-1.体内分布研究显示抗体与肺腺癌组织有效结合.尾静脉注射48h后,瘤/血和瘤/肌肉放射性比值均达最大值,分别为(4.06±0.13)和(5.17±0.97) %ID·g-1.SPECT示抗体与肿瘤有效结合.抗体注射后48 h的T/NT值(3.73±0.20)明显高于12h(1.26±0.15)、24 h(2.18±0.16)和72 h(2.85±0.18)(均P<0.01).结论:利用肺腺癌细胞A549和PrxⅠ为靶抗原,从噬菌体抗体库中筛选获得具有较高特异性的抗Prx Ⅰ肺腺癌单链抗体.在体内抗体能与肺腺癌组织特异性结合.

关键词：噬菌体抗体库、单链抗体、Peroxiredoxin Ⅰ、放射免疫显像、腺瘤病、肺

所属期刊栏目：36

分类号：Q782;R817(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金资助课题30370422

在线出版日期：2015-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：841-846