衔接蛋白2基因siRNA表达载体的构建及鉴定

摘要：

目的:构建针对衔接蛋白2的μ2亚单位 (AP2-μ2) 的短链干涉RNA(siRNA)及其表达载体,转染细胞后观察其对AP2-μ2基因的干涉作用.方法:设计AP2-μ2靶向的发夹状siRNA,据此设计合成3条互补的寡核苷酸链,退火后分别连接到 pSilencer 3.1 neo H1 载体,转化扩增后进行序列测定.待转染细胞分为对照组、Scramble plasmid、AP2 plasmid-1,AP2 plasmid-2 和 AP2 plasmid-3组.用脂质体转染法将3组 siRNA 重组质粒与阴性对照质粒 (Scramble plasmid) 转染大鼠心肌细胞株H9C2,通过RT-PCR法检测 AP2-μ2基因表达水平的变化.结果:合成的6条寡核苷酸单链凝胶电泳显示多个电泳条带,分别退火后,产物经凝胶电泳显示形成单一条带.双链DNA模板与载体质粒连接后,用BamH I和HindⅢ双酶切,凝胶电泳可见4 300和66 bp的酶切片段.DNA测序连接的核酸序列与设计序列一致,表明AP2-μ2基因的3条 siRNA 载体构建成功.RT-PCR检测,在AP2 plasmid-1组,转染的H9C2细胞中AP2-μ2的基因表达水平较阴性对照组降低约96%.结论:成功地构建了针对AP2-μ2基因的3条siRNA载体,其中AP2 plasmid-1 转染细胞后可显著抑制AP2-μ2 基因表达.

关键词：RNA干涉、衔接蛋白2、短链干涉RNA

所属期刊栏目：36

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：吉林省科技厅白求恩专项基金资助课题200705122

在线出版日期：2015-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：331-335