抗菌肽CM与血管内皮生长因子VEGF_(121)在大肠杆菌中表达及鉴定

摘要：

目的:构建和表达人VEGF_(121)的基因工程菌,为肿瘤血管的靶向治疗提供实验数据.方法:通过PCR引物延伸的方法,获得SUMO-CM-VEGF_(121)融合基因;将该融合基因与原核表达载体pET22b连接后转化至Rosetta-gami(DE3)宿主细胞中,通过IPTG诱导获得可溶性表达.将融合蛋白经DEAE阴离子交换层析、Ni-NTA和分子筛等方法进行纯化,用SUMO酶切除分子伴侣SUMO后,最终获得融合蛋白CM-VEGF_(121).结果:DNA测序,设计合成的SUMO-CM-VEGF_(121)融合基因为774 bp;所构建的表达菌株Rosetta-gami (DE3)/pET22b-SUMO-CM-VEGF_(121)在20℃诱导24 h可溶性最好,其可溶性表达为菌体可溶性蛋白的21%.Western blotting检测该表达产物与人VEGF单克隆抗体具有特异性结合能力.结论:原核表达载体pET22b和Rosetta-gami宿主菌为CM-VEGF_(121)最合适的条件,解决了其表达量低和不可溶问题.

关键词：抗菌肽CM、血管内皮生长因子、融合蛋白、纯化

所属期刊栏目：36

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：吉林省科技厅科技发展计划项目资助课题20090244;吉林省教育厅"十一五"科学技术研究项目资助课题20070309

在线出版日期：2015-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：285-290