RNA干扰乳腺癌MCF-7细胞HSPA8基因表达
目的:构建并筛选高干扰率的热休克蛋白8 (HSPA8)(相对分子质量70 000)基因干扰质粒,为进一步研究HSPA8基因在乳腺癌中的作用提供材料.方法:根据GenBank所发表的HSPA8的基因序列合成4个干扰片段,依次构建1、2、3和4组干扰质粒:pGPU6/GFP/Neo-349、pGPU6/GFP/Neo-818、pGPU6/GFP/Neo-931和pGPU6/GFP/Neo-1180,将这4组干扰质粒分别转染至人乳腺癌MCF-7细胞,并设阴性及空白对照组.经过G418筛选后得到稳定转染的细胞株,采用RT-PCR和Western blotting方法分别从mRNA和蛋白质水平检测各组干扰质粒对HSPA8基因的干扰效果.结果:RT-PCR检测转染shRNA干扰质粒的各组MCF-7细胞的HSPA8基因mRNA转录水平与未转染组比较,干扰质粒1组HSPA8基因的表达量下降了25.0%,干扰质粒2组下降了37.5%,干扰质粒3组下降了43.7%,干扰质粒4组下降了68.5%.Westen-blotting检测结果显示:各实验组与对照组之间蛋白表达比较差异有显著性(P<0.05),pGPU6/GFP/Neo-1180干扰质粒的干扰效率最高.结论:成功构建了HSPA8基因的干扰质粒,提示HSPA8基因及其表达产物为研究HSPA8基因在乳腺癌的发生、发展中的作用提供了材料.
热休克蛋白8基因、乳腺肿瘤、RNA干扰、MCF-7
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Q78(基因工程（遗传工程）)
国家重大基础研究计划资助课题2006CB910505
2015-09-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
271-275
