用Fura-2/AM检测皮层神经细胞〔Ca2+〕i的方法

摘要：

@@脑缺血再灌流损伤或迟发性神经元死亡的发生与神经的细 胞内游离钙离子浓度〔Ca2+〕i超负荷紧密相关，通过测定神细胞内游离Ca2+ 的含量 及在药物、毒物影响下的含量改变，可提供Ca2+与缺血再灌流脑细胞损伤间关联的直 接证据，并可阐明药物、毒物作用的机理与环节。因此，建立合适的检测神经细胞内游离钙 离子浓度的方法，对于深入分析脑缺血再灌流损伤或迟发性神经元死亡的分子机理有着十分 重要的意义。
1　材料与方法
1.1　材　料　Fura-2/AM为中科院生理研究所产品，用二甲基亚砜(DM SO)配成1 mmol/L浓度，分装后置于-20℃备用。EGTA和Triton X-100均为Sigma公司产品 ，其余试剂均为国产分析纯产品。Wistar大鼠由本校动物部饲养。
1.2　大脑皮层神经细胞的准备　参照Dildy和Leslie［1］方法 ，略有改进。取新生0～1 d Wistar大鼠乳鼠，生理盐水冲洗和75%酒精灭菌后，断头置冰上 ，小心快速地剥离双侧大脑半球上部外表面，立即置于冷Hank氏液(mmol/L：NaCl 137,KCl 5.0,CaCl2 1.3，MgSO4 0.8，Na2HPO4 0.6,KH2PO4 0.4,NaHCO3 3.0 ，葡萄 糖5.6，pH7.4)中洗2次后剪碎，置于0.125%胰酶液中37℃轻轻搅拌20 min，加入冷DMEM 培养基(含10%小牛血清)中止消化。200目过筛，3 000 r/min离心5 min，再以Hank氏液洗一 次，最后用DMEM培养基(含10%小牛血清)制备成2×106* ml-1细胞悬液。台盼兰排斥试验检查神经细胞存活率。

关键词：Fura-2/AM、神经细胞、胞内游离钙离子浓度、荧光

所属期刊栏目：27

分类号：R338.1;R-332(人体生理学)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共2页

页码：119-120