琥珀酸半醛脱氢酶抑制剂筛选方法的建立及其在天麻成分筛选中的应用

摘要：

目的：建立琥珀酸半醛脱氢酶（SSADH）抑制剂类抗癫痫神经系统药物筛选模型，并运用此模型对中药天麻有效成分及其类似物进行体外活性筛选和构效关系分析。方法制备琥珀酸半醛脱氢酶（SSADH）酶系液，并以紫外分光光度法评价 SSADH 活力与吸光度相关性；优化酶催化反应温度、反应时间、底物 NAD ＋浓度、底物琥珀酸半醛（SSA）浓度、缓冲液 pH、底物 SSADH 浓度等因素对 SSADH 活性的影响，建立 SSADH 酶系活性筛选方法；采用文献已有报道的对羟基苯甲醛（HBA）为阳性对照验证此方法可靠性，同时，对 HBA 结构类似物测定结果及作用机制进行分析。结果成功构建 SSADH 酶抑制剂活性筛选方法，HBA 测定结果与前期文献报道抗癫痫作用一致。确定 SSADH 的紫外光谱（UV）活性检测体系及其检测缓冲液配置组成，其反应条件为37℃，温孵30 min，酶活力相关吸光度在340 nm 处测量。HBA 和香草醛（Va）对 GABA-T 的构效关系一致，—OH 及苯环上的—CHO 为 SSADH 酶抑制作用必须药效团。结论该模型可应用于 SSADH 酶抑制剂的高通量筛选，也为研究中药中 SSADH 酶抑制剂类活性成分的筛选及其作用机制研究提供参考。

关键词：琥珀酸半醛脱氢酶抑制剂、构效关系、抗癫痫、天麻、对羟基苯甲醛、高通量筛选

所属期刊栏目：39

分类号：R284.2(中药学)

资助基金：北京中医药大学科研创新团队项目2011-CXTD-15;北京中医药大学中青年教师自主科研课题面上项目2015-JYB-JSMS023

在线出版日期：2016-09-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：664-669