转录通读环状RNA rt-circ-HS促进低氧诱导因子1α表达和肾癌细胞增殖与侵袭

摘要：

目的:鉴定肾癌细胞中由染色体14q23上相邻基因低氧诱导因子1 α(hypoxia inducible factor 1α,HIF1 α)和小核 RNA 激活复合多肽(small nuclear RNA activating complex polypeptide 1,SNAPC1)形成的转录通读 RNA 及转录通读环状 RNA(read-through circular RNA HIF1α-SNAPC1,rt-circ-HS),研究 rt-circ-HS 在肾癌细胞及组织样本中的表达、对肾癌细胞生物学行为的影响以及对其亲本分子HIF1α的调控机制.方法:逆转录PCR(reverse tran-scription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和 Sanger测序检测不同肿瘤细胞中由HIF1α-SNAPC1形成的转录通读RNA和rt-circ-HS的表达.构建不同类型的肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)组织芯片共437例,用原位杂交检测rt-circ-HS表达.采用小干扰RNA(small interference RNA,si-RNA)和人工过表达质粒干预rt-circ-HS,用细胞计数实验(cell counting kit 8,CCK8)、EdU掺入实验、Transwell细胞迁移和细胞侵袭实验分别检测rt-circ-HS对肾癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响.用RT-PCR和Western blot验证干预rt-circ-HS对亲本分子HIF1α和SNAPC1表达的影响.构建包含 rt-circ-HS、HIF1α 3'端非翻译区(3'untranslated region,3'UTR)与微小 RNA 539(microRNA 539,miR-539)结合序列的野生型和突变型质粒,用双荧光素酶报告基因系统检测rt-circ-HS、HIF1α 3'UTR与miR-539的结合.结果:发现一个新的rt-circ-HS,由HIF1α外显子(exon)6-SNAPC1 exon 2转录通读本产生,在肾癌细胞786-O 中高表达.Sanger 测序证实 rt-circ-HS 全长 1144 nt,包括 HIF1α exon 2-exon 6 和 SNAPC1 exon 2-exon 4,是一个新的转录通读环状RNA.原位杂交结果显示,rt-circ-HS在RCC中阳性表达率为67.5％(295/437),在不同类型RCC中表达率不同.发现miR-539是HIF1α 的转录后负调控分子;rt-circ-HS作为分子海绵与miR-539结合,竞争性抑制miR-539与HIF1α 3'UTR的结合,解除其对HIF1α的转录后负调控作用,促进亲本分子HIF1α表达及肾癌细胞增殖、迁移和侵袭.结论:rt-circ-HS作为分子海绵结合miR-539,抑制其对HIF1α的负调控作用,促进亲本分子HIF1α表达及肾癌细胞增殖、迁移和侵袭.

关键词：转录通读环状RNA HIF1α-SNAPC1、肾细胞癌、低氧诱导因子1α、小核RNA激活复合多肽1、微小RNA 539

所属期刊栏目：55

分类号：R365(病理学)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家自然科学基金;四川大学专职博士后研发基金

在线出版日期：2023-04-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：217-227