甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶SeCDA2a的外源表达及酶活力测定

摘要：

[目的]为了研究甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶SeCDA2a的酶学性质,探索其对甜菜夜蛾幼虫发育过程的影响,为甜菜夜蛾的生物防治提供新靶标.[方法]以pMD19-T-Secda 2a重组质粒为模板,PCR扩增得到Secda 2a基因.构建原核表达载体pET-28a-Secda 2a,IPTG诱导蛋白表达.利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,构建重组转座载体pFastBac HT A-Secda2a,脂质体转染昆虫细胞Sf9,Western blot对SeCDA2a重组蛋白进行分析,以对硝基苯胺为底物利用分光光度计测定其酶活力.[结果]Secda 2a在大肠杆菌和Sf9中均成功表达61kDa的重组蛋白,与预测分子量大小相符.IPTG终浓度为0.50 mmol/L、37℃诱导培养4h时蛋白表达量最高.昆虫细胞Sf9表达的重组蛋白SeCDA2a的酶活力是1.57 U/mL.[结论]本研究实现甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶基因Secda 2a的外源表达,测定重组蛋白SeCDA2a的酶活力.

关键词：甜菜夜蛾、几丁质脱乙酰酶、外源表达、酶活测定

所属期刊栏目：34

分类号：S186(农业生物学)

资助基金：国家自然科学基金项目2023202043;国家现代花生产业体系CARS-13资助31471775

在线出版日期：2019-01-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：34-38