柔嫩艾美耳球虫MIC4-N的真核表达

摘要：

应用RT-PCR技术扩增柔嫩艾美耳球虫的MIC4-N端基因并去掉信号肽,为了表达检测和纯化的方便,设计引物时改变了3端的终止密码子,使MIC4-N的C末端带有c-myc和6His抗原标签.通过双酶切,使加工好的MIC4-N基因连接到毕赤酵母表达载体pPICZαA上,转化JM109感受态细胞.再经EcoR Ⅰ与Not Ⅰ双酶切、菌落PCR及测序鉴定,证明目的基因与真核表达载体pPICZαA构建成功,单酶切重组表达载体、电转转入GS115酵母感受态细胞中.用含高浓度Zeocin的YPD平板筛选酵母菌落,菌落PCR法鉴定转化成功的阳性菌,在BMMY培养基中摇瓶培养,并用甲醇诱导,经SDS-PAGE及Western Blot鉴定,蛋白分泌表达成功.

关键词：柔嫩艾美耳球虫、微线体蛋白4-N、毕赤酵母真核表达

所属期刊栏目：26

分类号：S831.7(家禽)

资助基金：国家自然科学基金资助项目31072128

在线出版日期：2012-01-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：24-27