中温α-淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌中的整合及高效表达

摘要：

从中温α-淀粉酶生产菌株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)264中克隆得到中温α-淀粉酶基因(amyL)并构建了重组表达质粒pAX01-amyL.该质粒转化枯草芽孢杆菌264后利用同源重组机制将由木糖操纵子引导的amyL表达盒整合入枯草芽孢杆菌染色体的lacA位点,以增加中温α-淀粉酶基因的拷贝数.经淀粉平板产酶初筛及Southernblot鉴定,成功分离获得了可高效分泌表达中温α-淀粉酶的基因工程菌ZHWY.该菌株在摇瓶发酵75 h后α-淀粉酶酶活可达到730 U/mL,比酶活为156 U/mg总蛋白,与原始菌株264相比提高了70％,且继代过程中表达水平稳定.在5L发酵罐中,枯草芽孢杆菌ZHWY发酵所产中温α-淀粉酶酶活最高达到1450 U/mL,具有良好的工业应用前景.

关键词：中温α-淀粉酶、枯草芽孢杆菌、染色体整合

所属期刊栏目：42

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金青年科学基金21406005

在线出版日期：2015-08-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：78-82