重排NAD+合成途径提高磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶活性

摘要：

为提高磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的催化活性,构建了两个载体分别表达:(1)磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC);(2)与NAD+合成相关的关键酶,包括烟酸转磷酸核糖激酶(pncB)、烟酸单核苷酸腺苷酰转移酶(nadD)和NAD+合成酶(nadE).将这两个载体共转化大肠杆菌,获得重组菌E.coli(pET-pepc&pUC-pncB-nadD-nadE).聚丙烯酰胺凝胶电泳显示这些酶均实现了高表达.摇瓶发酵显示,与单独过表达PEPC的重组菌相比,双质粒工程菌的PEPC酶活提高了4.36倍;与野生型大肠杆菌相比,双质粒工程菌的琥珀酸产量提高了4.23倍,达到0.9g/L,富马酸产量提高了5.23倍,达到5.4 mg/L.上述结果表明加强NAD+合成途径提高了PEPC活性,并增加了还原三羧酸循环的代谢流量.

关键词：大肠杆菌、NAD+、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、琥珀酸、富马酸

所属期刊栏目：42

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金21076013/21276014;国家“973”计划2012CB725200

在线出版日期：2015-08-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：68-72