丙烯酰CoA合成酶在大肠杆菌中的表达及其酶活性表征

摘要：

以橙色绿屈挠菌(Chloroflexus aurantiacus)dsm636基因组DNA为模板,应用PCR技术扩增并克隆了丙烯酰CoA合成酶(ACS)基因,并连接到表达载体pET-22b(+)质粒上,构建了pET-22b(+)-Acs重组质粒,测序结果100％正确.将重组质粒pET-22b(+)-Acs转化到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中,通过氨苄霉素抗性平板筛选,构建了大肠杆菌BL21(DE3)-pET-22b(+)-Acs基因工程菌.重组菌株经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE电泳分析,目标条带出现在分子量约160000处,表明丙烯酰CoA合成酶基因在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达；体外酶活实验证明,所表达的丙烯酰CoA合成酶是具有活性的.

关键词：丙烯酸、丙烯酰CoA合成酶基因、3-羟基丙酸、大肠杆菌

所属期刊栏目：40

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金21076017;国家"973"计划2012CB725200

在线出版日期：2013-06-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：75-78