His-tag标记的嗜热菌来源L-脯氨酸脱氢酶的纯化与性质

摘要：

以引入了His-tag做标记的超嗜热菌Thermococcus profundus色素依存性L-脯氨酸脱氢酶基因片段为目的基因,在宿主大肠杆菌Rosetta-gami(DE3) Competent Cells中表达目的蛋白.细胞培养液经超声菌体破碎、热处理、Ni Sepharose层析分离,得到纯度较高的His-tag色素依存性L-脯氨酸脱氢酶,比酶活是纯化前的5倍.纯化后的酶液经凝胶电泳分离得到片段为58600, 40200, 22300的3段短肽.通过对该酶性质的初步探索,得出在温度50℃,体系pH8.0,300mmol/L Tris缓冲溶液的条件下,L-脯氨酸脱氢酶酶活最高,为1.5U/mL.

关键词：超嗜热菌、His-tag、色素依存性L-脯氨酸脱氢酶、镍亲和色谱

所属期刊栏目：37

分类号：Q93(微生物学)

在线出版日期：2011-01-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：121-125