山蛭素(haemadin)在毕赤甲醇酵母中的表达及其性质鉴定

摘要：

人工合成山蛭素基因后,利用基因重组的方法将山蛭素的基因克隆到pPicZαA载体,经过线性化,电转至毕赤酵母GS115中表达.使用浓度高达1 500 μg/mL的zeocin筛选得到高拷贝插入的GS115-H菌株,经过优化摇瓶表达条件表达量达到100 mg/L.摇瓶培养物经离心取上清,分别使用3 kD和10 kD的超滤膜超滤,阳离子交换层析和凝胶过滤层析等纯化步骤之后,得到纯度高于95%的目的蛋白,产出量为40 mg/L,回收率为40%.通过以chromozym TH为底物的凝血酶酰胺水解实验证实了其体外生物学活性:其抑制凝血酶常数为(2.46±0.13)×10-13 mol/L.

关键词：山蛭素、凝血酶抑制剂、毕赤酵母表达、抗凝剂

所属期刊栏目：41

分类号：Q816(生物工程学(生物技术))

在线出版日期：2005-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：506-513