加工番茄PCR-SSCP分子标记体系的建立与优化

摘要：

以加工番茄为试验材料,采用PCR-SSCP分子标记技术,对DNA提取方法、PCR反应程序、聚合酶链式反应-单链构象多态性分子标记体系的电泳条件、变性剂等诸多因素进行了研究,筛选和建立了多态性检出率高、带型清晰、重复性好的PCR-SSCP反应体系和反应程序.结果表明:采用CTAB法提取番茄叶片DNA时,在CTAB缓冲液中加入5 mol/L NaC1,第一次抽提离心速度和离心时间分别为8 000 r/min和15 min,可以获得高质量的DNA,PCR扩增程序为94℃5 min,94℃ 1min,52℃30 s,72℃1min,72℃10 min,29个循环,退火温度52℃,引物大小100～300 bp、98℃变性10 min,非变性聚丙烯酰胺凝胶浓度8％,电泳1.5～2.5 h,聚丙烯酰胺凝胶中不添加甘油为加工番茄PCR-SSCP分子标记体系最佳的条件组合.

关键词：加工番茄、PCR-SSCP、聚丙烯酰胺凝胶、银染

分类号：S641.2

资助基金：石河子大学资助项目gxjs2012-yz08;新疆生产建设兵团科技局资助项目2014AB004;科技支疆计划资助项目2014AB004.

在线出版日期：2015-09-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：88-93