偃麦草SRAP-PCR反应体系优化

摘要：

以偃麦草叶片DNA为模板,利用单因子和L16(45)正交实验设计对影响偃麦草SRAP-PCR反应效果的Mg2+、引物、dNTPs、DNA、Taq DNA聚合酶5种因素进行优化,并比较了不同退火温度对扩增反应的影响,通过综合比较分析建立偃麦草SRAP-PCR的优化反应体系.结果表明:优化的偃麦草SRAP-PCR总体系20 μL中,Mg2+ 1.75 mmol/L,引物0.15μmol/L,dNTPs 0.20 mmol/L,DNA 50 ng,Taq DNA聚合酶0.75 U,2 μL 10×PCR buffer;Mg2+和引物浓度对扩增效果影响最大,DNA浓度影响最小;采用该体系对32份偃麦草进行验证,扩增结果清晰稳定,此体系的建立为利用SRAP分子标记进行偃麦草遗传多样性、抗性标记等研究奠定了技术基础.

关键词：偃麦草、SRAP、体系优化

分类号：S688.4(观赏园艺（花卉和观赏树木）)

资助基金：新疆自然科学基金资助项目2012211A060.

在线出版日期：2015-03-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：91-97