毛梾ISSR-PCR反应体系的建立

摘要：

以毛株叶片为试材,通过单因素2次循环试验对毛株ISSR反应体系进行优化,建立了毛株ISSR-PCR的最佳反应体系和扩增程序.结果表明:PCR反应体系总体积为25 μL,其中10×Buffer 2.5μL,模板DNA用量50 ng,Taq DNA聚合酶用量1.5U,Mg2+浓度2.0 mmol/L,引物浓度0.6 μmol/L,dNTPs浓度0.15 mmol/L;扩增程序:94℃预变性5min; 94℃变性50 s,48.8～59.1℃退火60 s,72℃延伸1.5 min,38个循环;最后72℃延伸10 min.在此基础上,从100条ISSR通用引物中筛选出17条多态性好、稳定性高的引物,并优化了它们的退火温度.这一优化体系的建立,为开展毛株种质资源鉴定、遗传多样性及分子育种方面的研究提供了技术依据和参考.

关键词：毛株、ISSR、单因素2次循环试验、体系优化、引物筛选

分类号：S792.99(森林树种)

资助基金：国家林业公益性行业专项资助项目200804010;陕西省教育厅科研计划资助项目06JK153

在线出版日期：2014-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：114-119