基于慢病毒包装和CRISPR技术建立病毒感染关键基因CLTC敲除细胞系

摘要：

网格蛋白是病毒进入内体系统时的关键蛋白,同时还可能参与病毒的胞内转运,目前该蛋白的具体作用范围报道还不一致.为了构建网格蛋白重链基因敲除细胞系,以研究其在病毒感染过程中的功能,本研究基于CRISPR/Cas9系统,首先通过包装慢病毒建立网格蛋白重链基因特异性打靶载体,使用嘌呤霉素对慢病毒感染的Huh7细胞进行阳性筛选,利用96孔板梯度稀释法获得单克隆细胞,提取细胞基因组DNA,PCR扩增后进行测序验证,同时提取细胞蛋白,利用Western Blot实验进行蛋白敲除验证,最后进行细胞增殖活性检测和脱靶效应评估.最终本研究获得了一株网格蛋白重链基因敲除Huh7细胞系;通过脱靶效应评估,显示最可能的10个脱靶位点均不存在脱靶现象,且该基因敲除不影响细胞增殖活性.本研究成功构建了一株网格蛋白重链基因敲除Huh7细胞系,为研究网格蛋白在病毒进入宿主细胞时的功能建立了细胞模型.

关键词：CRISPR/Cas9、CLTC、基因敲除

所属期刊栏目：39

分类号：R373.1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家重点研发计划2022YFC2303402

在线出版日期：2023-06-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：800-804