3种蚊媒病毒快速荧光PCR检测方法与性能评价

摘要：

建立寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)、登革病毒(Dengue virus,DENV)和黄热病毒(Yellow fever virus,YFV)3种蚊媒传染病核酸快速实时荧光定量检测方法.以寨卡病毒polyprotein gene基因,登革病毒NS5基因,黄热病毒3'UTR基因作为靶区域设计相应的引物探针,探针的5'端分别标记不同的荧光基团,3'端标记相应的淬灭基团,对扩增体系中引物探针浓度、热启动Taq酶浓度、逆转录酶浓度、RNA酶抑制剂浓度分别进行优化.构建了一种可同时用于寨卡病毒、登革病毒和黄热病毒三重快速荧光PCR检测体系,25μL扩增体系中ZIKV、DENV和YFV的引物浓度分别为 200 nmol/L、240 nmol/L 和 240 nmol/L;探针浓度分别为 200 nmol/L、240 nmol/L 和 80 nmol/L;热启动Taq酶、逆转录酶和RNA酶抑制剂的终浓度为分别为2.5U/反应、60U/反应和80U/反应.该检测体系对3种病原体的最低检测限均为1.0×103拷贝/mL,在MIC IAT C2-48和ABI7500两种不同型号的实时荧光定量PCR仪上检测结果一致,对登革热、寨卡和黄热病毒血清样本检测均为阳性扩增,与丙型肝炎病毒、乙型脑炎病毒、副流感病毒、腺病毒等无交叉反应.因此,本研究建立的寨卡病毒、登革病毒和黄热病毒的三重快速荧光PCR检测体系可用于对上述3种病毒的定性或定量检测.

关键词：快速荧光PCR检测、蚊媒病毒

所属期刊栏目：39

分类号：R373.3(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：连云港海关原连云港出入境检验检疫局自立项课题项目LYG2017KJ06

在线出版日期：2023-06-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：743-751