乙肝病毒BCP区突变(A1762T/G1764A)对乙肝病毒复制的影响研究

摘要：

通过构建乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)单倍体分子,阐明HBV基本核心启动子突变(A1762T/+G1764A,BCP)对HBV复制的影响.本研究收集了 HBeAg阴性的慢乙肝患者,将其中两例BCP突变的序列通过重叠PCR克隆到HBV1.3倍体的复制质粒;构建环状的HBV单倍体分子,转染Huh7.0细胞后,通过ELISA、实时荧光定量PCR等分析BCP突变对病毒复制的影响;通过荧光素酶实验分析BCP突变对HBV preC mRNA转录的影响.55例HBeAg阴性的慢乙肝患者中有30例带有A1762T/G1764A的突变;克隆带有BCP突变的临床序列到HBV 1.3倍体转染细胞后,上清中HBeAg为阴性,表面抗原降低10％(P＞0.05);构建的HBV单倍体环化后形成闭合环状的cccDNA分子,转染细胞后,结果表明BCP突变后,HBeAg下降55.48％(P＜0.05),表面抗原无显著性差异(P＞0.05),细胞内病毒颗粒中DNA水平为野生型的3.18倍,上清中HBV DNA为野生型的1.36倍;BCP突变后preCmRNA水平降低81.05％,而3.5kbRNA水平无显著性差异,核心抗原(HBcAg)表达增多.本实验结果表明基本核心启动子突变(A1762T/G1764A)减少了前核心RNA(preC mRNA)的转录,导致HBeAg分泌减少,而病毒核心蛋白表达增加,导致细胞内病毒DNA复制能力增强.

关键词：乙型肝炎病毒、cccDNA、基本核心启动子、定点突变

所属期刊栏目：39

分类号：R373.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家重点研发计划;重庆市渝中区科技项目;重庆市技术创新与应用发展专项重点项目

在线出版日期：2023-06-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：710-719