6种呼吸道病毒RT-RPA检测体系构建与应用

摘要：

早期快速诊断是防控呼吸道病毒传播的有效手段,研发灵敏、特异、快速的分子检测技术方法是早期防控的前提和保障.本研究建立同时快速检测甲型流感病毒(Influenza A virus,FluA)、副流感病毒1型(Human parainfluenza virus 1,HPIV-1)、呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)通用型、人偏肺病毒(Human metapneumovirus,HMPV)、人博卡病毒(Human bocavirus,HBoV)通用型和腺病毒 B 型(Adenovirus type B,AdV-B)6种呼吸道病毒重组酶聚合酶扩增(Recombinase polymerase amplification,RPA)检测体系新的技术方法.选择人β-actin基因外显子区域序列作为内标基因,根据6种病毒特异性基因的保守区设计引物探针,结合商业化的逆转录重组酶聚合酶扩增(Revers transcript recombinases polymerase amplification,RT-RPA)反应试剂,优化体系的引物及探针浓度、温度、反应时间,构建6种病毒的RT-RPA检测体系.优化后病毒和内标基因的RT-RPA检测引物和探针终浓度分别为400 nmol/L和200 nmol/L,最佳反应温度为39℃,最优反应时间为15 min.敏感性实验结果表明,本研究建立的RT-RPA反应体系对6种病毒的敏感性为1.0×104拷贝/mL,其中,对AdV-B的敏感性高达1.0×103拷贝/mL;特异性试验结果表明,不同病毒间特异性好,无交叉反应;重复性试验结果表明,6种病毒对高浓度(1.0×107拷贝/mL)和低浓度(1.0×104拷贝/mL)标准品检测出峰时间T变异系数小于5％,重复性好;对100例临床标本进行回顾性实验测试,与市售实时荧光PCR检测试剂盒的阳性符合率、阴性符合率和总体符合率均为100％.本研究提示,建立的RT-RPA检测体系可用于国境口岸对上述6种呼吸道病毒的日常监测与快速检测.

关键词：呼吸道病毒、逆转录重组酶聚合酶扩增、快速检测

所属期刊栏目：39

分类号：R373.1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：南京海关原江苏出入境检验检疫局立项课题项目;南京海关原江苏出入境检验检疫局立项课题项目

在线出版日期：2023-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：354-363