真核表达纯化的SARS-CoV-2N蛋白在不同人群血清检测中的应用性能分析

摘要：

通过真核系统表达纯化新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的全长核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein,N蛋白),分析其抗原性与应用性能.将SARS-CoV-2N蛋白表达质粒转染HEK-293T细胞后,通过Western Blot和免疫荧光验证蛋白表达以及表达定位.对N蛋白进行纯化后,通过Western Blot和ELISA并采用多种血清样本(WHO参比品血清、正常人血清、新冠灭活疫苗接种后血清、新冠感染者恢复期血清)对该N蛋白在血清抗体检测中的应用性能进行分析.比较真核系统与原核系统表达的N蛋白抗原性上的差异,并分析基于真核系统表达N蛋白构建的IgG抗体ELISA检测体系与获批的商品化新冠RBD(Receptor binding domain)IgG抗体ELISA检测试剂盒及用于检测中和抗体的活病毒微量中和试验结果间的相关性.结果显示,真核系统表达的全长N蛋白主要定位于胞质,作为抗原检测新冠IgG抗体,具有比原核系统表达的N蛋白更高的检测灵敏度.针对新冠感染者恢复期血清,基于哺乳动物细胞表达的N蛋白构建的ELISA体系检测的IgG抗体滴度与试剂盒检测的RBD-IgG抗体滴度以及中和抗体滴度之间具有良好的相关性.本研究表明真核系统表达纯化的SARS-CoV-2N蛋白具有良好的抗原性与检测性能,为SARS-CoV-2血清学检测方法的建立与优化以及进一步明确N蛋白诱发的免疫反应特点提供了参考.

关键词：新型冠状病毒、核衣壳蛋白、真核表达、抗原性、ELISA

所属期刊栏目：39

分类号：R373.1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：北京市科委项目Z211100002521017

在线出版日期：2023-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：313-321