优化Ⅲ型脊髓灰质炎病毒在Vero细胞中的增殖条件

摘要：

Ⅲ型脊髓灰质炎病毒经下游灭活工艺后抗原损失量较大,可以通过优化上游培养工艺来提高病毒产量.为研究病毒接种时间、感染复数(MOI)和病毒收获时间对Ⅲ型脊髓灰质炎病毒感染性滴度(CCID50)和D抗原的影响,优化Ⅲ型脊髓灰质炎病毒在Vero细胞中的增殖条件,为生产及毒种制备提供指导依据,本研究以接种胞龄和MOI为病毒接种的两个变量条件,以病毒滴度和D抗原含量为病毒收获液中病毒产量的判定指标.先固定MOI,在不同胞龄的Vero细胞上以相同MOI接种Ⅲ型脊髓灰质炎病毒,根据病毒收获液中病毒产量的结果筛选出产毒量最高的接种胞龄范围.然后以最佳产毒胞龄为固定条件,暨Vero细胞生长至96h～ 144h,以不同MOI接种病毒,进一步筛选出产毒量最高的MOI范围.结果显示,当MOI=0.003时,Vero细胞培养48h、72h、96h、120h和144h种毒组均在种毒后70h完全病变,Vero细胞培养120h种毒所得收获液D抗原含量和病毒滴度均为最高,分别为(331±31)DU/mL、(8.04±0.14)lgCCID50/mL.接种胞龄固定在96h ～ 144h范围,当MOI为0.001、0.01和0.1时,细胞完全病变时间分别为81h、66h和55h,所得病毒收获液的D抗原含量分别为(301.1±13.8)DU/mL、(303.7±15.6)DU/mL和(272.6±19.6)DU/mL,滴度分别为(7.88±0.13)lgCCID50/mL、(7.58±0.14)lgCCID50/mL 和(7.75±0.13)lgCCID50/mL.本研究提示,相同MOI下,不同细胞胞龄种毒后细胞达到完全病变时间相同;细胞培养至平台期前后接种Ⅲ型脊髓灰质炎病毒所获得的收获液D抗原含量和感染性滴度均最高;MOI影响Ⅲ型病毒病变进程,但对病毒产量影响不大;90％以上Vero细胞发生病变、脱落时为最佳收获病毒时间点.

关键词：Vero细胞、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒、感染性滴度、D抗原

所属期刊栏目：36

分类号：R373.2+2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：云南省重大科技专项生物医药项目号:2017ZF008

在线出版日期：2021-02-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1138-1142