tk1基因敲除Vero细胞株的建立及其在单纯疱疹病毒tk基因修复中的应用

摘要：

利用单纯疱疹病毒Ⅰ型(Herpes simp1ex virus type 1,HSV-1)标准株F细菌人工染色体(HSV-BAC)系统构建的HSV重组病毒由于存在tk基因缺陷,无法表达胸苷激酶,影响病毒潜伏/激活,故需对该基因进行修复.为此,本研究建立了tk1基因敲除的Vero细胞株(tk1-Vero),并利用该细胞株建立了次黄嘌呤-氨基蝶呤-胸腺嘧啶脱氧核苷(Hypoxanthine-aminopurine-thymidine,HAT)选择性培养液筛选方法,对经同源重组方式完成tk基因修复的病毒进行筛选.首先,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除Vero细胞tk1基因,通过有限稀释法建立tk1-Vero细胞株,采用DNA测序和Western Blot对tk1-Vero细胞株进行鉴定;比较HSV(F)和tk HSV(F)在tk1-Vero细胞和tk基因缺陷的入骨肉瘤143细胞中的增殖情况;在tk1-Vero细胞中,采用HAT选择性培养液筛选方法,对tk基因修复病毒进行筛选.结果 显示,本研究成功建立了稳定的tk1-Vero细胞株;与143细胞相比,tk1-Vero细胞更适于病毒增殖及tk基因修复病毒的筛选;最后在tk1-Vero细胞中,利用HAT选择性培养液成功筛选出tk基因修复病毒.本研究表明,采用tk1-Vero细胞株建立的HAT选择性培养液筛选方法可以对tk基因修复病毒进行高效快速筛选.

关键词：单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)、胸苷激酶基因、Vero细胞、基因敲除、基因修复

所属期刊栏目：36

分类号：R373.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：广州市属高校科研项目项目号:1201620304

在线出版日期：2020-10-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：829-833