荧光素酶标记的重组人3型腺病毒的构建及分析

摘要：

人3型腺病毒在人DSG2受体转基因鼠体内复制及侵染等生命过程尚不清楚.本研究旨在构建含萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase,Fluc)报告基因的复制型重组人3型腺病毒,为可视化重组人3型腺病毒的应用奠定基础.通过PCR扩增萤火虫荧光素酶报告基因,克隆入去掉EGFP基因的人3型腺病毒穿梭质粒pSKA3E3LR(EGFP),经双酶切后与人3型腺病毒骨架质粒pBRAd3-EGFP的PCR扩增片段经重组酶Exnase体外重组的方法,得到中间载体,最后与pBRAd3-EGFP酶切片段连接,得到重组腺病毒质粒pAd3-LUC;转染AD293细胞,将包装成功的重组腺病毒rAd3-LUC纯化并免疫动物,分析重组腺病毒的特性和在小鼠体内的免疫反应.结果 显示采用体外重组、酶切连接等方法成功获得到重组人3型腺病毒质粒pAd3-LUC,线性化的pAd3-LUC转染AD293细胞包装拯救得到重组腺病毒rAd3-LUC,观察到细胞病变和检测到荧光素酶的稳定表达,rAd3-LUC免疫小鼠抗血清可以识别并中和重组腺病毒rAd3-LUC(滴度约128～256).本研究成功构建了E3区缺失并嵌入荧光素酶的复制型重组人3型腺病毒rAd3-LUC,为监控人3型腺病毒在人DSG2受体转基因小鼠体内复制及侵染等生命过程奠定基础.

关键词：人腺病毒(HAdV)、萤火虫荧光素酶(Fluc)、报告基因、构建、免疫反应

所属期刊栏目：36

分类号：R373.9;Q78(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金;题目:人B组腺病毒纤毛蛋白与DSG2受体亲和力的差异及其对病毒致病力的影响研究;国家科技重大专项;题目:发热呼吸道感染住院患者病原谱及病原特征研究;广州市科技重大专项;题目:病毒感染重症救治的特异性被动免疫应用研究;腺病毒单克隆抗体药物研发;国家科技重大专项;题目:临床来源的呼吸道类突发急性传染病病毒分离培养及筛选鉴定;广州市科技计划项目;题目:人腺病毒和流感病毒动物模型的建立及应用研究;广东省自然科学基金项目;题目:构建Ad3/TAV fiber knob嵌合型重组体建立人腺病毒重症感染树鼩动物模型

在线出版日期：2020-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：660-669