hDPP4转基因及定点敲入小鼠模型的建立及其对MERS-CoV易感性比较

摘要：

中东呼吸系统综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)是2012年发现的新型高致病性冠状病毒,其病死率高达34.4％.人二肽基肽酶-4(human dipeptidyl peptidase-4,hDPP4)分子是MERS-CoV进入宿主细胞的受体.为了获得稳定的MERS-CoV易感小鼠模型,本文分别利用Tol2转基因技术和CRISPR/Cas9技术将hDPP4受体导入C57BL/6小鼠,筛选获得转基因小鼠hDPP4-Tg、定点敲入小鼠hDPP4-KI;通过Q-PCR、Western Blot及活体成像技术,分析了hDPP4基因的表达特征.结果 显示,在hDPP4-Tg小鼠中,其表达水平较低,在脑中高表达;而在hDPP4-KI中整体表达水平高,表达优势脏器为肺.假病毒感染实验表明,hDPP4-Tg几乎不易感,而hDPP4-KI小鼠对假病毒高度易感.进而,对假病毒感染hDPP4-KI小鼠的感染途径、感染剂量、是否剃除被毛等条件进行优化,获得了稳定易感的MERS-CoV假病毒感染模型,并利用该模型初步评价了单克隆抗体hMS-1的体内活性.本研究显示,即使相同的受体基因,不同策略构建的遗传修饰小鼠模型的效果差异较大;受体分子表达水平与模型的易感性高度相关;本研究获得的高效而稳定的MERS-CoV假病毒感染模型可望在抗体评价、疫苗研制、药物筛选等领域提供模型工具,提示将受体分子定点插入小鼠基因组、高表达受体基因是成功构建病毒易感模型首选策略.

关键词：中东呼吸系统综合征冠状病毒(MERS-CoV)、假病毒、基因修饰小鼠、受体表达、易感性

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分类号：R373.1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家传染病防治科技重大专项2017ZX10304402-002

在线出版日期：2020-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：650-659