自噬相关基因Atg3在埃博拉病毒组装过程中的作用研究

摘要：

自噬是真核细胞清除胞内冗余物质的降解机制,也是细胞针对病原体入侵的一种天然免疫机制.自噬相关基因3 (Autophagy-related gene 3,Atg3)在细胞自噬发生过程中起决定性作用.为研究Atg3对埃博拉病毒(Ebola vvirus,EBOV)组装的影响,本研究首先根据CRISPR/Cas9技术构建了携带有Atg3基因靶向向导RNA (guide RNA,gRNA)、表达Cas9的重组质粒pSpCas-Atg3,将此质粒转染至人胚胎肾细胞293T中,之后采用流式分选结合有限稀释法筛选单细胞克隆.细胞基因测序及Western Blot试验表明成功获得了Atg3基因敲除的细胞系.在Agt3基因敲除细胞系和野生型细胞中分别共同转染表达EBOV囊膜蛋白(Glycoprotein,GP)和基质蛋白的重组质粒,包装病毒样颗粒(Virus-like particles,VLP);同时在两种细胞中组装整合有EBOV的重组HIV假病毒,获得的假病毒感染非洲绿猴肾细胞(Vero细胞),通过测定报告基因的活性判定病毒对细胞的侵入能力.结果 显示Atg3基因缺失后,VLP所整合的GP蛋白显著增多,假病毒对细胞的侵染能力也明显增强(P＜0.001),表明Agt3能够负调控EBOV的组装和入侵.本研究为开发新抗病毒药物提供了新思路.

关键词：自噬(Autophagy)、自噬相关基因3(Atg3)、埃博拉病毒(EBOV)、囊膜蛋白(GP)

所属期刊栏目：35

分类号：R373.9;R511(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：黑龙江省农垦总局重点科研计划项目HK-KYZD190312

在线出版日期：2019-12-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：888-894