草鱼Fibulin-4蛋白与草鱼呼肠孤病毒外衣壳蛋白相互作用的研究

摘要：

草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)是当前引起我国草鱼出血病的主要病原,其外衣壳蛋白通常在病毒的组织嗜性和细胞嗜性上发挥重要作用.本研究利用共定位、Dot-Blot技术和His-Pull Down技术,验证了草鱼Fibulin-4蛋白与草鱼呼肠孤病毒外衣壳蛋白的相互作用.将pDsRed1N1-VP7,pDsRed1N1-VP56分别与pEG-FP-Fibulin-4共转染草鱼性腺细胞GCO.结果显示,病毒蛋白VP7,VP56和草鱼蛋白Fibulin 4均分布于细胞质中,两种蛋白都与Fibulin-4有部分重叠.应用Dot-Blot Overlay技术,将纯化获得的GST与GST-Fibulin-4蛋白倍比稀释杂交到PVDF膜上,经过His-VP7,His-VP56蛋白的孵育,结果表明随着杂交的蛋白量从低到高,蛋白信号由弱到强,His-VP7与His-VP56都能够吸附于GST-Fibulin-4蛋白上并发生相互作用,而不能吸附GST蛋白.利用Pull Down技术,裂解细胞表达的GFP蛋白与GFP-Fibulin-4蛋白,结合His-VP7,His-VP56的HisPur CobaltResin,在Elution中均能检测到GFP-Fibulin-4蛋白质,而检测不到对照蛋白质GFP,进一步证实了VP7,VP56与Fibulin-4蛋白之间的相互作用.

关键词：草鱼呼肠孤病毒(GCRV)、Fibulin-4、蛋白互作、亚细胞定位、Pull Down

所属期刊栏目：34

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：现代农业产业技术体系建设专项CARS-45-19

在线出版日期：2018-08-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：557-564